单纤维记录实验

单纤维记录属于一种细胞外的电生理记录技术，主要是利用金属电极，引导与记录周围神经单纤维的传入放电脉冲，是早期用以判定传入纤维类型及脉冲数与不同感受器活动关系的一项经典技术。由于其记录稳定，可以长时间引导单根神经纤维的放电脉冲，足以提供充分的采样数据进行放电序列时间模式的分析。近年来该技术在神经放电的非线性分析和神经信息传导方式以及慢性痛信号的研究中再次受到重视。

1.用混合麻醉药(a-氯醛糖和乌拉坦）将动物麻醉后置于手术台上，暴露记录的神经干，用四周皮肤及筋膜等制成记录槽。

2.将动物悬挂在记录台上，动物体温用数控恒温热板保持在37℃-38℃之间。若是离体神经干，则轻放在特制的记录槽内，并待续灌流氧饱和的生理溶液。

3.在记录浴槽内加入温热的液状石蜡(35℃-37℃),在邻近的皮下组织插入参考电极。

4.在体视显微镜放大(x40)条件下，用精心修磨的游丝锐在石蜡油槽中轻轻撕去严密包围神经干的外膜，然后逐条分离神经细束，再将分离的神经细束的一端悬挂在单根或双根铅金丝（直径约30µm)引导电极上，即可引导单纤维放电。

5.神经纤维的放电脉冲经过放大器将在示波器和计算机上同时显示并记录，通常分离成功的神经细束可以连续稳定引导放电数小时。

6.根据放电的波幅和波形是否相同，确定是否为单纤维放电。在计算机上记录单根纤维动作电位的原始放电以及放电时间序列散点图和放电密度直方图以备分析。由于单纤维记录属于细胞外记录技术，因此，它的放电幅度与膜片钳和细胞内记录不同，其单位为微伏(µV)'而且基线不是膜电位的水平。但是，由于单纤维记录相对稳定，所以非常有利千长时程观察传入脉冲的自发和诱发放电，而且对于分析放电模式来说可以记录足够的数据。常规单纤维记录的结果可在计算机屏幕上显示如下（图3-I)。

成功分离与引导单纤维放电的要点是：

1.首先要设法维持好实验动物的全身状态，如麻醉深度、体温与呼吸等，以便保证施加细束分离的神经干处于良好的供血状态，分离成功率会显著提高，在离体神经干标本引导单纤维放电时，需及时维持充氧生理溶液的灌流，浴液温度以32°C为宜；

2.选择两把与修磨适用的不锈钢游丝摄，其尖端既要细尖又要严密合缝，以便准确而灵巧地钳夹与分离神经细束。此时实验者在镜下操作的熟练程度与经验至关重要；

3.分离细束过程应尽量减少对神经干与神经细束的损伤，将细束悬挂到引导电极时避免过度牵拉。

单纤维记录的关键是分离神经细束的优劣。分离细束的直径因检测纤维类型而异，检测A类纤维的细束直径约为20-50µm,检测C类纤维的细束小于20µm,分离细束的长度约500µm。一根细束中常含有多条神经纤维，引导时只需其中有一条纤维具有放电活动就可以实现引导单纤维放电脉冲的要求。有时尽管有几条纤维同时显示放电活动，只要其幅度不影响单纤维放电的引导即可。

来源：《神经生物学实用实验技术》