醛缩酶的测定实验
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原理
D-果糖-1,6-二磷酸 ⇌ 二羟基丙磷酸盐+3-磷酸-D-甘油醛
D-甘油醛-3-磷酸以酰肼的形式,腙在 240 nm 处有吸收光。
<link />材料与仪器
醛缩酶
肼硫酸盐 FDP-Na3H
分光光度计
步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
0.9 ml 测定混合物
0.1 ml 醛缩酶溶液
每隔 10 min 记录 240 nm、25℃ 处的吸光值,空白对照用水取代果糖-1,6-二磷酸
注意事项
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常见问题
试剂:
3.5 mmol/L 肼硫酸盐溶于 1 mmol/L EDTA 中,pH 7.5[溶解 445 mg(Mr=130.1)和 372 mg EDTA·Na2·2H2O(Mr=130.1)和 372 mg EDTA·Na2·2H2O(Mr=372.2)在 1 L H2O 中,并用 1 mol/L NaOH 调节到 pH 7.5]
12 mmol/L果糖-1,6-二磷酸(FDP-Na3H,Mr=406.1;487 mg 溶于 100 ml H2O,调节至 pH 7.5)
溶解醛缩酶,大约 1 U/ml(使用前准备)
<link />来源:丁香实验