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醛缩酶的测定实验

最新修订时间:

原理

D-果糖-1,6-二磷酸 ⇌ 二羟基丙磷酸盐+3-磷酸-D-甘油醛


D-甘油醛-3-磷酸以酰肼的形式,腙在 240 nm 处有吸收光。

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材料与仪器

醛缩酶
肼硫酸盐 FDP-Na3H
分光光度计

步骤

实验所需「试剂」具体见「其他」


0.9 ml 测定混合物


0.1 ml 醛缩酶溶液


每隔 10 min 记录 240 nm、25℃ 处的吸光值,空白对照用水取代果糖-1,6-二磷酸

注意事项

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常见问题

试剂:


3.5 mmol/L 肼硫酸盐溶于 1 mmol/L EDTA 中,pH 7.5[溶解 445 mg(Mr=130.1)和 372 mg EDTA·Na2·2H2O(Mr=130.1)和 372 mg EDTA·Na2·2H2O(Mr=372.2)在 1 L H2O 中,并用 1 mol/L NaOH 调节到 pH 7.5]


12 mmol/L果糖-1,6-二磷酸(FDP-Na3H,Mr=406.1;487 mg 溶于 100 ml H2O,调节至 pH 7.5)


溶解醛缩酶,大约 1 U/ml(使用前准备)

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来源:丁香实验

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