丙酮酸铁氧还原蛋白还原酶的测定实验
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原理
丙酮酸合酶,丙酮酸:铁氧还原蛋白 2-氧化还原酶(乙酰-CoA 化)
丙酮酸 + CoA + 氧化型细胞色素 c ⇌ 乙酰-CoA + CO2 + 还原型细胞色素 c
材料与仪器
酶样品
Tris-HCl 细胞色素 c 丙酮酸 CoA
分光光度计
步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
0.98 ml 实验混合物
0.02 ml 酶样品
25℃ 时,于 550 nm 处吸收值增长。细胞色素 c 的吸收系数(还原-氧化) ε550=21×103 l/(mol·cm)。
注意事项
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常见问题
试剂:
0.05 mol/L Tris-HCl,pH 7.3
0.01 mol/L 细胞色素 c(Mr=12380,620 mg 溶于 5 ml 水中)
0.10 mol/L 丙酮酸(丙酮酸钠,Mr=110.0;110 mg 溶于 10 ml 水中)
0.01 mol/L CoA(游离酸,Mr=767.7;CoA ·Li3,Mr=785.4;23 mg 溶于 3 ml 水中)
来源:丁香实验