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冷冻干燥保存

相关实验:病毒的保存实验

最新修订时间:

原理

含水物质首先经过冷冻,然后在真空中使水分升华,干燥,在这种低温、干燥和缺氧环境下,微生物的生长和代谢暂时停止,因而保存期较长,便于运输。该法需要冻干机等设备,并需保护剂。保护剂一般采用脱脂牛奶或血清等。保护剂的作用机理是在冷冻干燥的脱水过程中稳定病毒结构,防止细胞膜受冷冻或干燥而造成损伤。真空冻干病毒比较稳定,可于室温短期保存, 4~8℃长期保存。此法综合利用了各种有利于毒种保存的因素,具有成活率高,变异性小等优点,是常用的较理想的毒种保存方法之一。

材料与仪器

待保存病毒
保护剂 95% 乙醇
安瓿管 真空泵

步骤

1. 准备安瓿管。市售的安瓿有直管式的,也有底部为球形的球式安瓿,也可选用中性硬质玻璃自制安瓿管。安瓿管清洁后,将标有病毒的标签放人安瓿管内,高压灭菌后备用。


2. 制备保护剂。冻于菌种的保护剂种类很多,常用脱脂牛奶,可配成 20%乳液,分装,高压灭菌,并作无菌试验。


3. 制备病毒悬液。吸取 3 ml 无菌牛奶加入毒种,轻轻摇动,再用手搓动试管,制成均匀的病毒悬液。


4. 分装及预冻。用无菌的长颈滴管将病毒悬液分装于安瓬管底部,每管装 0. 2 ml 。将安瓬管上端烧熔成细颈,将安瓬整个浸入装有干冰和 95% 乙醇的预冻槽内,槽内温度约为- 50℃~- 40℃, 可使悬液冻结成固体。


5. 真空干燥。完成预冻后,开动真空泵抽气,气压降至 133. 3 kPa 以下,维持冻结剂可于 4 h后移去,继续于室温中抽气,达到完全干燥。


6. 封管。待毒种完全干燥后即从干燥缸内取出安瓿瓶,置于抽气管上抽成真空,约需 3~10 min。用高频真空检测仪检查后,置 4℃冰箱保存。

注意事项

1. 一般病毒应保藏于低温、清洁和干燥的地方。


2. 毒种操作必须在无菌条件下进行,防止污染。


3. 对于已发生变异的病毒,可通过接种易感动物将具有毒力的病毒重新选择出来,该法还可同时使一些表型变异的病毒恢复原有特性。


4. 实验室用培养基保存毒种时,应保存两套,一套供保存传代,另一套供日常应用。


5. 病毒株的保存需有专人负责,同时有专门的记录薄,记录的内容有:①毒株的名称及数量;②毒株的来源(研究室名、时间、毒株从何种材料上分离、传代于何种动物、传代数、分离情况等);③本实验室传代的情况(传代者姓名,传代的代数,传代后的保存方法及保存数量)④保存毒种的容器(安瓶、玻璃试管、塑料冻存管等);⑤毒株的保存性质(组织块、悬液、液体或冻干);⑥毒株的毒力;⑦保存年、月、日。

来源:丁香实验

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