离子交换层析技术
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原理
离子交换层析（Ion Exchange Chromatography简称为IEC）是以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。
材料与仪器
离子混合物样本
离子交换缓冲液
离子交换层析柱 梯度混合器 电导表
离子交换缓冲液
离子交换层析柱 梯度混合器 电导表
步骤
1. 配制离子交换层析缓冲液，安装好层析柱，但以离子交换层析缓冲液取代其中的凝胶过滤缓冲液。
2. 用起始梯度的缓冲液溶解含蛋白质混合物的样品。
3. 弃去柱床上部的大部分缓冲液，并将样品加在凝胶的顶上。只要样品的离子强度不超过起始缓冲液的离子强度，上样体积不限。
4. 让样品流入凝胶柱床，并用缓冲液冲冼层析柱的内壁，用吸管往凝胶的顼上 加一层1 cm 高的缓冲液。
5. 连接梯度混合器，分部收集100个级分，每个组份相当于约1%总禅度体积。测各组分的A280以确定蛋白峰的所在，用电导表测离子强度以确定禅度的形状。
注意事项
1.洗脱液体积应足够大，一般要几十倍于床体积，从而使分离的各峰不至于太拥挤。
2.梯度的上限要足够高，使紧密吸附的物质能被洗脱下来。
3.梯度不要上升太快，要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态。目的物的过早解吸，会引起区带扩散；而目的物的过晚解吸会使峰形过宽。
常见问题
1.离子交换剂的再生与保存离子交换剂可在柱上再生。如离子交换纤维素可用2mol/：NaCl淋洗柱，若有强吸附物则可用0.1mol/LNaOH洗柱；若有脂溶性物质则可用非离子型去污剂洗柱后再生，也可用乙醇洗涤，其顺序为：0.5mol/LNaOH-水-乙醇-水-20%NaOH-水。保存离子交换剂时要加防腐剂。对阴离子交换剂宜用0.002%氯已定（洗必泰），阳离子交换剂可用乙基硫柳汞（0.005%）。有些产品建议用0.02%叠氮钠。
2.进一步全面了解离子交换层析请查阅：https://research.fhcrc.org/content/dam/stripe/hahn/methods/biochem/Ion_Exchange_Chromatography_Handbook.pdf
来源：丁香实验
