使 用 磁 性 纳 米 颗 粒 进 行 核 酸 运 送

使 用 磁 性 纳 米 颗 粒 进 行 核 酸 运 送

材料

试剂

司）的操作手册。对聚阳离子或聚阴离子包被的磁性颗粒，如 CombiMAG, 不需要对载体进行亲和素偶联。病毒载体可以使用亲和素偶联，并且使用相应的链霉亲和素蛋白包被磁性颗粒。或者将载体与磁性颗粒共孵育即可 [最好使用阳离子包被磁性颗粒，但是阴离子包被颗粒可用于慢病毒（ H airnet al. 2005)]。

磷 酸 盐 缓 冲 液（P B S )， H E P E S 缓 冲 盐 溶 液（H B S ) ， 0 . 9 % 的 NaCl, 或用于载体制备的无血清细胞培养基。

转染试剂的选择

仪器

37°C 细胞孵箱

微量离心管

永久磁体

稀土永久磁体 (rare earth permanent magnet) 是最合适的磁体，例 如 ，钦铁硼磁体 (neodymiumiron boron magnet )。制造厂商包括 IBS M agnet(柏林，德 国）， Dexter Magetic Technologies
(芝 加 哥 ，伊 利 诺 伊 州）， Bisbell Magnetic product Ltd. (Burton-on-T rent, 英 国 ），或者 amfmagnetiC(Masc 〇 t , 澳大利亚）。设计和优化用于磁力转染的磁碟已经商业化生产, 可 以 从 OZ
Bioscience ( Marseille，法 国 ；www.ozbioscience.com ) 或 chemicell ( 柏 林 ，德 国 ；WWW.chemicell.com) 购 买 。

最实用的磁片是圆形的，直 径 〇.5 cm、 lcm 、 1.5 cm、 2 cm 或更大，厚 度 0.5 cm。长方体磁片的尺寸为 2 cm X lcm X 0. 5 cm。

注意：稀土永久磁体会产生永久的磁场，必须小心操作。这些磁体可以删除磁

存储设备，干扰电子或电子机械设备（如心脏起搏器） 的正常工作。
细胞培养器皿的选择参见表 1。

方法
对每一种磁性颗粒和载体类型，磁性颗粒与基因载体的比例必须进行优化。具体的优化方法参见 www.ozbiosciences.com.

1 . 用去离子水制备 lmg/m l 的磁性纳米颗粒。

多数厂商提供的磁性纳米颗粒以不同浓度（mg/ml) 的液体悬浮溶液形式提供。多聚阳离子和多聚阴离子包被的磁性颗粒在含盐溶液中会自发聚集。

2•计算需要的磁性纳米颗粒的量。对非病毒载体，按每微克核酸使用〇.2〜4 ug外 层包被的磁性颗粒进行运送；15 ug 聚 氮 丙 啶（polyethylenimine) 包被的磁性颗粒足以 结 合 I X l O ¹⁰的腺病毒颗粒。不同培养器皿推荐加入的核酸剂量、非病毒载体转染 参 见 表 1 ，病 毒 载 体 磁 力 转 染 见 表 2 。加入需要量的磁性颗粒到一个微量离心管中。