原理
利用磷在酸性溶液中与钼酸铵起反应生成磷酸钼酸络合物，能被N-甲基-对氨基苯酚硫酸盐（米吐尔）还原生成用蓝，在试剂中加入吐温-80以抑制蛋白质的干扰。
材料与仪器
步骤
一、实验试剂：
l．钼酸铵溶液：在50ml去离子水中加浓H2SO43.3ml，再加钼酸铵0.2克溶解后加吐温-80 5ml，最后加去离子水至100ml。
2. N-甲基-对氨基苯酚硫酸盐（米吐尔）溶液：称取对甲氨基酚硫酸盐2克溶于80ml去离于水中，加无水硫酸钠5克；最后加去离子水至100m1。
3. 显色应用液：取1液10ml，2液l.lml混合即可应用。
4. 磷标准液：
（l）无机磷标准贮存液（lml=lmgP）称取无水磷酸二氢钾（KH2PO4）4.39克用去离于溶解后移入1L容量瓶中，并稀释至刻度，再加氯仿2ml防腐，置冰箱中保存。
（2）无机磷标准应用液（lml＝0.04mgP或1.29mmol/L）：取无机磷标准贮存液4ml，加入100ml容量瓶中，加去离于水稀释至刻度，再加人氯仿防腐，置冰箱中保存．
二、实验操作：取试管3支，标明测定，标准和空白管，然后按下表操作：
三、计算：
血清无机磷mmol/L=测定管吸光度／标准管吸光度×1.29
参考值：成人：0.96-1.62 mmol/L（3.0－5.0 mg/dL）
儿童：1.45-2.1 mmol/L（4.5-6.5 mg/dL）
l．钼酸铵溶液：在50ml去离子水中加浓H2SO43.3ml，再加钼酸铵0.2克溶解后加吐温-80 5ml，最后加去离子水至100ml。
2. N-甲基-对氨基苯酚硫酸盐（米吐尔）溶液：称取对甲氨基酚硫酸盐2克溶于80ml去离于水中，加无水硫酸钠5克；最后加去离子水至100m1。
3. 显色应用液：取1液10ml，2液l.lml混合即可应用。
4. 磷标准液：
（l）无机磷标准贮存液（lml=lmgP）称取无水磷酸二氢钾（KH2PO4）4.39克用去离于溶解后移入1L容量瓶中，并稀释至刻度，再加氯仿2ml防腐，置冰箱中保存。
（2）无机磷标准应用液（lml＝0.04mgP或1.29mmol/L）：取无机磷标准贮存液4ml，加入100ml容量瓶中，加去离于水稀释至刻度，再加人氯仿防腐，置冰箱中保存．
二、实验操作：取试管3支，标明测定，标准和空白管，然后按下表操作：
三、计算：
血清无机磷mmol/L=测定管吸光度／标准管吸光度×1.29
参考值：成人：0.96-1.62 mmol/L（3.0－5.0 mg/dL）
儿童：1.45-2.1 mmol/L（4.5-6.5 mg/dL）
注意事项
1. 血清标本不能溶血，采血后及时分离血清，黄疸和脂血标本应做标本主白。
2. 本法对血清白. 球蛋白比例倒置的标本易产生混浊，解决的方法是用30g/L三氯醋酸1.8ml分别混匀后离心，取上清液1.0ml，磷标准液同样进行处置，然后和显色液4.0ml混合后进行比色。
3. 米吐尔试剂应少量配制，放置时间不易太长，否则正常血清有时也会产生轻度混浊。
2. 本法对血清白. 球蛋白比例倒置的标本易产生混浊，解决的方法是用30g/L三氯醋酸1.8ml分别混匀后离心，取上清液1.0ml，磷标准液同样进行处置，然后和显色液4.0ml混合后进行比色。
3. 米吐尔试剂应少量配制，放置时间不易太长，否则正常血清有时也会产生轻度混浊。
来源：丁香实验
