比色法测定血清乳酸脱氢酶（LDH）实验

乳酸脱氢酶催化L-乳酸脱氢，生成丙酮酸，丙酮酸和2,4-二硝基苯肼反应，生成丙酮酸、二硝基苯腙，在磁性溶液中呈棕红色，其颜色深浅与丙酮酸浓度成正比，由此计算酶的活力单位。

一、 实验试剂：

1. 底物缓冲液（含0.3mol/L乳酸，PH8.8）：

称取二乙醇胺2.1g，加蒸馏水约80ml，以1mol/L盐酸调节至PH8.8，加水至100ml。

2. 11.3mmol/L NAD溶液：称取NAD15mg（含量为70％，则称取21.4mg）溶于2ml蒸馏水中，4℃保存至少可用2周。

3. lmmol/L 2，4-二硝基苯肼溶液：称取2，4-二硝基苯肼198mg加10mol/L盐酸100ml，待溶解后加蒸馏水至1000ml，置棕色玻璃瓶，室温中保存。

4. 0.4mol/L NaOH溶液

5. 0.5mmol/L丙酮酸标准液：准确称取丙酮酸钠（标准品级MW=110.06）11mg，以底物缓冲液溶解后，移入200m1容量瓶，加底物缓冲液稀释至刻度，临用前配制。

二、 实验操作：取16mm×100mm试管，按表操作

室温放置5分钟后，波长440 nm，比色杯光径 1.0 cm，用B溶液调零，读取各管吸光度，并与相应的酶活力单位数绘制标准曲线。

金氏单位定义：以100 ml 血清，37℃作用15 min，产生1微摩尔丙酮酸为一个单位。

参考值：190 - 437  金氏单位

1. LDH只作用L-乳酸，如用L-乳酸钠，只用DL-乳酸

2. 草酸盐只能抑制乳酸脱氢酶的活力，故不能用草酸钾作为抗凝剂的抗凝血来测定方法。

3. 红细胞内LDH活力较血清中约高100倍，故溶血标本不能测定。

4．结果高于2500单位时，将血液稀释后测定，结果乘以稀释倍数。

5. 比色应在5-15分钟内完成，否则吸光度降低。