原理
葡萄糖氧化酶能催化葡萄糖氧化成葡萄糖醛酸,并产生过氧化氢:葡萄糖十2H2O+O2=葡萄糖酸十2H2O2。
在色原性氧受体(如联大菌香胺,4氨基安替比林偶联酚)的存在下,过氧化物酶催化过氧化氢,氧化色素原,生成有色化合物。
在色原性氧受体(如联大菌香胺,4氨基安替比林偶联酚)的存在下,过氧化物酶催化过氧化氢,氧化色素原,生成有色化合物。
材料与仪器
步骤
一、实验试剂:
l、lmol/L磷酸盐缓冲液(PH7.0):溶解无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g于800ml蒸馏水中,用lmoL/L氢氧化钠或盐酸调节PH值至70,然后用蒸馏水稀释至1L.
2、酶试剂:取葡萄糖氧化酶1200W 过氧化物酶1200w,4-氨基安替比林10mg,叠氮钠10Omg,加上磷酸盐缓冲液至80ml左右,调节pH7.0加磷酸盐缓冲液到100ml,置冰箱保存,至少可稳定三个月。
3、酚溶液:重蒸馏酚100mg溶于100ml蒸馏水中,贮存棕色瓶中.
4、酶酚混合试剂;酶试剂和酚溶液等量混合,在冰箱内可以存放一个月.
5、葡萄糖标准应用液(5.6mmol/L)
二、操作:
取数支16mmm×100mm试管,按下表进行操作。
混匀,置37℃水浴中,保温15min,用分光光度计,波长505nm,比色杯光径1.0cm,以空白管调零,分别读取标准管及测定管吸光度。
三、计算:
血清葡萄糖mmol/L=测定管吸光度/标准管吸光度
参考值:空腹血清葡萄糖为3.89-6.11mmol/L
l、lmol/L磷酸盐缓冲液(PH7.0):溶解无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g于800ml蒸馏水中,用lmoL/L氢氧化钠或盐酸调节PH值至70,然后用蒸馏水稀释至1L.
2、酶试剂:取葡萄糖氧化酶1200W 过氧化物酶1200w,4-氨基安替比林10mg,叠氮钠10Omg,加上磷酸盐缓冲液至80ml左右,调节pH7.0加磷酸盐缓冲液到100ml,置冰箱保存,至少可稳定三个月。
3、酚溶液:重蒸馏酚100mg溶于100ml蒸馏水中,贮存棕色瓶中.
4、酶酚混合试剂;酶试剂和酚溶液等量混合,在冰箱内可以存放一个月.
5、葡萄糖标准应用液(5.6mmol/L)
二、操作:
取数支16mmm×100mm试管,按下表进行操作。
混匀,置37℃水浴中,保温15min,用分光光度计,波长505nm,比色杯光径1.0cm,以空白管调零,分别读取标准管及测定管吸光度。
三、计算:
血清葡萄糖mmol/L=测定管吸光度/标准管吸光度
参考值:空腹血清葡萄糖为3.89-6.11mmol/L
注意事项
1、新配制的葡萄糖标准液主要是α型,故需放置2h以上(最好过夜),待等适衡后方可应用.
2、葡萄糖氧化酶催化反应的最适PH范围(6.5-8.0),但当PH低至6.6时,反应终点的吸光度略有下降,选用PH7.0土0.1.
3、由于温度对本法影响较大,故试剂从冰箱取出达到室温时,再进行测定.
4、测定样本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆为好。
2、葡萄糖氧化酶催化反应的最适PH范围(6.5-8.0),但当PH低至6.6时,反应终点的吸光度略有下降,选用PH7.0土0.1.
3、由于温度对本法影响较大,故试剂从冰箱取出达到室温时,再进行测定.
4、测定样本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆为好。
来源:丁香实验