血浆纤维蛋白原测定实验

在血浆中加入适量的亚硫酸钠；使纤维蛋白原形成沉淀，其余的蛋白质均尚在溶液中．将沉淀溶于氯化钠溶液中，双缩脲测定蛋白质的量．

一、实验试剂：

1.12.5%亚硫酸钠溶液：称取无水亚硫酸钠（A．R或GP〕125g溶于蒸馏水中并用蒸馏水稀释至1000m1．

2. 9g／L NaCL 溶液

3. 双缩脲试剂

4. 标准白蛋白血清

二、操作方法：

在15×100mm试管内加入血浆0.5ml，再加水125g／L亚硫酸钠溶液混匀，置于37℃水溶15min或更长时间，取出、离心、倾弃上清液，沉淀再以125g／L亚硫酸钠溶液洗三个多小时．洗时先同小量亚硫酸钠使它分散均匀．离心应倾弃上请液，将试管置于滤纸上，淋干管内液体于管内加入9g／L  NaCL 1.0ml，充分混台使沉淀溶解即为“测定管”，在另一试管中用0.lm1刻度吸管准确加标准血清0.05m1并加入9g／L  NaCL溶波0.95m1，混合作为标准试管,在另一试管中加入9g／L 氯化钠溶液1ml作为空白管．

在空白管标准及测定管内各加双缩脲试剂，混合后的室温放置30min540nm波长进行比色以空白管校正吸光度到零点，读取各管内吸光度读数。

三、计算：

测定管吸光度／标准管吸光度×O.1×标准血清蛋白浓度＝纤维蛋白原g／L血浆

1. 亚硫酸钠与血浆作用，有时10min尚不能使纤维蛋白析出，可适应延长时间．

2. 以亚硫酸钠先洗涤沉淀是为了支除纤维蛋白以外的蛋白质，所以在洗涤时须将沉淀均匀分散．

3. 在洗涤沉淀时，如纤维蛋白原被亚硫酸钠溶液全部或部分溶解可再将试管置37℃水浴，以待纤维蛋白原析出．

选择标准液时不能任选未知性能的蛋白作为血清蛋白质的标准液。