材料与仪器
牛肝脏 牛肌肉
乙腈 正己烷 氮气 三乙胺
离心 C8SPE柱 针筒滤膜 色谱柱
乙腈 正己烷 氮气 三乙胺
离心 C8SPE柱 针筒滤膜 色谱柱
步骤
1. 提取与净化
称取匀浆的牛肝脏或肌肉2.5 g,置于50 mL离心管中,加入8 mL乙腈,润动0.5 min, 2500 r/min离心5 min,取上清液。残留组织用8 mL乙腈重复提取一次,合并两次的上清液于500 mL的离心管中,加30 mL纯水-三乙 胺(30 + 0.045),过C8SPE柱(500 mg,3 mL),用 20 mL乙腈-水-三乙胺(40 + 60 + 0.1)淋洗,吹干;再用3 mL正己烷淋洗,吹干;用2 mL乙腈洗脱,收集。取4 mL纯水和6uL三乙胺加至乙腈洗脱液中。过C8SPE柱(500 mg,10 mL),用10 mL乙腈-水-三乙胺(30 + 70 + 0.1)淋洗,吹干,再用8 mL正己烷淋洗,吹干; 最后用2 mL乙腈洗脱,吹干,收集洗脱液于5 mL刻度试管内,50 ℃氮气吹干,用0.5 mL乙腈定容,过0.45 um针筒滤膜,进HPLC-MS/MS分析。
2. 液谱-质谱串联条件
色谱仪:Waters 2690;
流动相:乙腈-水-甲酸(95 + 5 + 0.1);
流速:0.2 mL/min;
色谱柱:C18 柱,150 mm,2.1 mm,3 um;柱温:(20 ± 2)℃;
进样量:1O0L;
质谱仪:电喷雾源(ESI);
毛细管电压:3.2 kV;
锥孔电压:70 V;
源温:120 ℃ ;
雾化气:300 ℃ ;
倍增电压:650 V;
碰撞气:氩气。
称取匀浆的牛肝脏或肌肉2.5 g,置于50 mL离心管中,加入8 mL乙腈,润动0.5 min, 2500 r/min离心5 min,取上清液。残留组织用8 mL乙腈重复提取一次,合并两次的上清液于500 mL的离心管中,加30 mL纯水-三乙 胺(30 + 0.045),过C8SPE柱(500 mg,3 mL),用 20 mL乙腈-水-三乙胺(40 + 60 + 0.1)淋洗,吹干;再用3 mL正己烷淋洗,吹干;用2 mL乙腈洗脱,收集。取4 mL纯水和6uL三乙胺加至乙腈洗脱液中。过C8SPE柱(500 mg,10 mL),用10 mL乙腈-水-三乙胺(30 + 70 + 0.1)淋洗,吹干,再用8 mL正己烷淋洗,吹干; 最后用2 mL乙腈洗脱,吹干,收集洗脱液于5 mL刻度试管内,50 ℃氮气吹干,用0.5 mL乙腈定容,过0.45 um针筒滤膜,进HPLC-MS/MS分析。
2. 液谱-质谱串联条件
色谱仪:Waters 2690;
流动相:乙腈-水-甲酸(95 + 5 + 0.1);
流速:0.2 mL/min;
色谱柱:C18 柱,150 mm,2.1 mm,3 um;柱温:(20 ± 2)℃;
进样量:1O0L;
质谱仪:电喷雾源(ESI);
毛细管电压:3.2 kV;
锥孔电压:70 V;
源温:120 ℃ ;
雾化气:300 ℃ ;
倍增电压:650 V;
碰撞气:氩气。
来源:丁香实验