丁香实验_LOGO
登录
提问
提问
我要登录
|免费注册
丁香通
点赞
收藏
wx-share
分享

无血清培养基的制备

相关实验:合成培养基配制实验

最新修订时间:

材料与仪器

ECM
蒸馏水
滤膜

步骤

1. 选择适宜的培养基质(ECM),先制备成贮存干液;

2. 使用前,贮存干液用高纯度的蒸馏水稀释成0.1 mg/ml 浓度的使用液;

3. 使用液用0.22 μm 孔径的微孔滤膜过滤除菌;

4. 用吸管吸取使用液,均匀涂于消毒灭菌的细胞培养器皿的细胞生长表面。使用液的用量可按每平方厘米表面加50 μl的溶液,为保证其表面全部被溶液浸湿,用量可适当增减;

5. 室温下静置5 分钟(使用胶原做基质时,可适当延长时间至24 小时),然后吸出多余的溶液;

6. 再用灭菌蒸馏水(100 μl/cm2)洗涤涂有ECM的表面,然后尽量将水分吸净控干;

7. 根据不同细胞生长特点,接种适宜浓度的细胞进行培养。

注意事项

1. 制备过程要在严格无菌条件下进行。

常见问题

一、自制无血清培养基举例

1. 小鼠胚胎癌细胞系培养基

DMEM/F12,1:1 混合成1000 ml;NaHCO3,2.4 g;HEPES(1.5 M),10.0 μl;硒酸(5×-6 M),10.0 μg;纤粘连蛋白,1 μg/cm2(37℃作用15—30 分钟);胰岛素,1000.0 μg;转铁蛋白,5000.0 μg。

2. NIH3T3 小鼠成纤维细胞培养基

DMEM/F12,1:1 混合;HEPES,15 mM;大豆胰酶抑制剂,0.1%;胰岛素,10.0 μg/ml;转铁蛋白,25.0 μg/ml;纤粘连蛋白,5.0 μg/ml。

3. 人支气管上皮细胞培养基

DMEM/F,1:1 混合;HEPES,15 mM;硒酸钠,2.5×10-8 M;胰岛素,5.0 mg/ml;胰高血糖素 0.2 μg/ml;维A酸10-9 M(或三碘甲状腺原胺酸5×10-10 M)。

4. 正常人乳腺上皮细胞培养基

MCDB170 基础培养液;胰岛素,5.0 μg/ml;氢化可的松,0.5 μg/ml;表皮生长因子(EGF),5.0 mμg/ml;乙醇胺,10-4 M;磷酸乙酸胺,10-4 M;转铁蛋白,10 μg/ml;牛垂体提取物,70 μg/ml。

5. 杂交瘤细胞系培养基

DMEM/F12,1:1 混合;NaHCO3,1.2 g/L;HEPES,15.0 mM;胰岛素,5.0 μg/ml;氨基乙醇,20.0 μM;硒酸,2.5 mM;转铁蛋白,35.5 μg/ml。

以上仅是个别实验室的应用配方,但仍有很大的参考意义。然而某一种成分是否必需,并不是绝对的,用量也可以变更。如杂交瘤细胞无血清培养基可去除氨基乙醇;转铁蛋白降至每毫升5 微克,同样也能获得继续分泌抗体的结果。

来源:丁香实验

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序