考马斯亮蓝法
最新修订时间：
原理
考马斯亮蓝G250 在酸性溶液时呈茶棕色, 最大吸收峰在465 nm。当与蛋白质结合后变成深蓝色, 最大吸收峰转至595 nm, 在1～100 μg/ ml 蛋白质浓度范围内成正比。
材料与仪器
蛋白质
考马斯亮蓝G250 乙醇 碳酸钠 氢氧化钠 硫酸铜 酒石酸钠 钨酸钠 钼酸钠 蒸馏水 磷酸 浓盐酸 硫酸锂 液体溴 酚酞
722S 型分光光度计 电子天平 离心机 容量瓶 试管 吸管
考马斯亮蓝G250 乙醇 碳酸钠 氢氧化钠 硫酸铜 酒石酸钠 钨酸钠 钼酸钠 蒸馏水 磷酸 浓盐酸 硫酸锂 液体溴 酚酞
722S 型分光光度计 电子天平 离心机 容量瓶 试管 吸管
步骤
1. 样品的制备
用台秤称取小白菜或其他植物10 g , 用剪刀剪碎后, 用碾钵碾成匀浆, 加水30 ml , 继续碾10 min , 倒入离心管中, 另加5 ml水将剩余物洗进离心管, 平衡后于1000 r/ min 离心15 min , 取上清10 ml 定容到100 ml , 待测。
2. 标准曲线的制作与样品测定
按下表操作，A . FOLIN 酚法 B . 考马斯亮蓝法
(标: 标准蛋白质溶液, F : FOLIN 试剂: K: 考马斯亮蓝 G250 试剂。自己制备的蛋白质溶液测定含量时注意稀释度)
注意事项
1. 蛋白质样品和呈色剂都不应有沉淀, 有沉淀应过滤除去。
2. 染料与蛋白质结合后, 形成的蓝色复合物易轻度沾附试管壁或比色皿, 每次使用不能用有着色的比色皿。使用完后应立即清洗干静。
来源：丁香实验
