原理
酚红(PSP)为指示剂,在碱性环境中呈现紫红色。PSP 静脉注射后，在体内不代谢，其消除主要由肾脏近曲小管分泌.因此可通过比色测定不同给药时间血浆中PSP 的光密度值,定量计算血中PSP的浓度。
材料与仪器
家兔
酚红溶液 稀释液 氢氧化钠 溶液 75%酒精 肝素钠 生理盐水
分光光度计 离心机 兔台 兔固定绳 手术器械 丝线 注 射器 针头 抗凝试管 离心试管 动脉夹 擦镜纸 滤纸 定量加样器
酚红溶液 稀释液 氢氧化钠 溶液 75%酒精 肝素钠 生理盐水
分光光度计 离心机 兔台 兔固定绳 手术器械 丝线 注 射器 针头 抗凝试管 离心试管 动脉夹 擦镜纸 滤纸 定量加样器
步骤
1. 麻醉并固定：取健康家兔一只，称重， 3%戊巴比妥钠1 ml /kg耳缘静脉注射麻醉，仰卧位固定在兔台上。
2. 手术：纵向切开颈部正中皮肤，分离颈下组织，找到气管，在气管一侧分离出颈总动脉，从颈总动脉下穿两线待用。由耳缘静脉注射肝素钠1 ml /kg，结扎远心端，近心端用动脉夹夹住，两端之间留2 cm 距离，用眼科剪在远心端朝近心端方向呈45 度角剪小口，然后朝向心方向插入塑料管，推进1～2 cm结扎并固定，塑料管用止血钳夹住，松开动脉夹。
3. 取空白血：自动脉导管取血约1 ml，置于编号的干燥抗凝试管中，轻摇混匀。
4. 给药及取血样：从耳缘静脉注射6 ml/kg 0.6%酚红溶液，给药后2. 5. 10. 20 和30分钟分别取血约1 ml，置于编号的干燥抗凝试管中，轻摇混匀。
5. 离心和测定：各取定量血样于编号离心试管中，以3000转/分离心10 分钟，分别取血浆0.1 ml，加入清洁编号试管内，加稀释液各2 ml，摇匀后静置5 分钟，以给药前血样做空白对照调零，于分光光度计560 nm波长处进行比色测定，记录其光密度值。将给药后不同时间的光密度输入计算器，计算出不同时间酚红的血浆浓度。
6. 制作酚红溶液1. 2. 4. 8. 16 umol·L-1标准曲线（由老师率先绘制）
实验结果及分析：
以浓度为横坐标，以光密度为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程。
以血浆药物浓度的对数值为纵坐标，时间为横坐标绘制时量曲线，一级消除动力学的时量关系呈直线。
该直线的方程式为logCt=lgCO-k/2.303·t
药物血浆半衰期T1/2=0.693/k(单位：h或min)
Vd=A/C0（A为给药总量）
用FX-3600P计算器，采用直线回归的运算程序，计算出不同时间酚红的血浆浓度。
血样药浓记录表
2. 手术：纵向切开颈部正中皮肤，分离颈下组织，找到气管，在气管一侧分离出颈总动脉，从颈总动脉下穿两线待用。由耳缘静脉注射肝素钠1 ml /kg，结扎远心端，近心端用动脉夹夹住，两端之间留2 cm 距离，用眼科剪在远心端朝近心端方向呈45 度角剪小口，然后朝向心方向插入塑料管，推进1～2 cm结扎并固定，塑料管用止血钳夹住，松开动脉夹。
3. 取空白血：自动脉导管取血约1 ml，置于编号的干燥抗凝试管中，轻摇混匀。
4. 给药及取血样：从耳缘静脉注射6 ml/kg 0.6%酚红溶液，给药后2. 5. 10. 20 和30分钟分别取血约1 ml，置于编号的干燥抗凝试管中，轻摇混匀。
5. 离心和测定：各取定量血样于编号离心试管中，以3000转/分离心10 分钟，分别取血浆0.1 ml，加入清洁编号试管内，加稀释液各2 ml，摇匀后静置5 分钟，以给药前血样做空白对照调零，于分光光度计560 nm波长处进行比色测定，记录其光密度值。将给药后不同时间的光密度输入计算器，计算出不同时间酚红的血浆浓度。
6. 制作酚红溶液1. 2. 4. 8. 16 umol·L-1标准曲线（由老师率先绘制）
实验结果及分析：
以浓度为横坐标，以光密度为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程。
以血浆药物浓度的对数值为纵坐标，时间为横坐标绘制时量曲线，一级消除动力学的时量关系呈直线。
该直线的方程式为logCt=lgCO-k/2.303·t
药物血浆半衰期T1/2=0.693/k(单位：h或min)
Vd=A/C0（A为给药总量）
用FX-3600P计算器，采用直线回归的运算程序，计算出不同时间酚红的血浆浓度。
血样药浓记录表
注意事项
1. 分离颈总动脉时，要把神经分离开，结扎的时候不能结扎神经。
2. 用取液器取上清液的时候，小心谨慎，不要取出血。
3. 离心时应将取血试管平衡后对称置入。
4. 禁止用手接触比色皿的光面，若有液体，只能用擦镜纸。
2. 用取液器取上清液的时候，小心谨慎，不要取出血。
3. 离心时应将取血试管平衡后对称置入。
4. 禁止用手接触比色皿的光面，若有液体，只能用擦镜纸。
来源：丁香实验
