原理
DPPH (2,2-二苯基-1-苦味基肼自由基，2,2-diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl)是一种比较稳定的脂性自由基，其N上有一个游离电子，其乙醇溶液呈紫色，在517 nm处有最大的吸收峰。加入抗氧化剂以后，DPPH捕捉一个电子与游离电子配对，紫色褪去，变为无色物质，在517 nm处的吸收消失，其褪色程度与其接受的电子数成定量关系。依此原理用分光光度计检测DPPH自由基与试样液反应后吸光值的变化，可检定试样提供氢原子、清除自由基抗氧化的能力。该法简便易行，灵敏可靠，不失为筛选天然产物抗氧化剂的好方法之一。
材料与仪器
虎杖 厚朴 黄芩 地榆 前胡 绞股蓝 麦冬 葛根 菊花 白芍
DPPH 无水乙醇 二甲基亚砜 维生素C
圆底烧瓶 旋转蒸发仪 真空干燥机 酶标板 酶标仪
DPPH 无水乙醇 二甲基亚砜 维生素C
圆底烧瓶 旋转蒸发仪 真空干燥机 酶标板 酶标仪
步骤
1. 中药材选择：学生自选4种药材
备选药材：虎杖、厚朴、黄芩、地榆、前胡、绞股蓝、麦冬、葛根、菊花、白芍
2. 中药提取
分别将适当切碎的中药材20 g放入250 ml圆底烧瓶中，各加入10倍量乙醇，回流提取1次，过滤后提取液用旋转蒸发仪浓缩，并用真空干燥机干燥，备用。
3. 试剂的配制
DPPH溶液：称取3.2 mg DPPH溶解于40 ml无水乙醇中，摇匀，备用。
提取物溶液：用二甲基亚砜(DMSO)作为溶剂配成浓度为5 mg/ml的溶液，备用。测定时稀释成相应浓度。
维生素C溶液：DMSO作为溶剂配成浓度为0.5 mg/ml的溶剂，备用。
4. 活性药材的筛选
取10 μL的样品溶液放入酶标板中，再加入90 μL的DPPH溶液，以维生素C溶液做阳性对照，以DPPH溶液作为标准，样品溶液为空白，室温放置30 min后，酶标仪517 nm测定，利用以下公式计算各种样品的清除率(k)，每个样品测定2次(按下图所示加样)。
式中：
Ae -- DPPH + 提取物混合溶液的吸光度
A0 -- 提取物溶液的吸光度
AD -- DPPH溶液的吸光度
AD0 -- DMSO+乙醇的吸光度
5. 活性药材的活性成分追踪
自主设计实验，对通过上述活性筛选出的活性最好的药材，进行提取和分离，对不同的流份进行进一步的活性追踪评价。
备选药材：虎杖、厚朴、黄芩、地榆、前胡、绞股蓝、麦冬、葛根、菊花、白芍
2. 中药提取
分别将适当切碎的中药材20 g放入250 ml圆底烧瓶中，各加入10倍量乙醇，回流提取1次，过滤后提取液用旋转蒸发仪浓缩，并用真空干燥机干燥，备用。
3. 试剂的配制
DPPH溶液：称取3.2 mg DPPH溶解于40 ml无水乙醇中，摇匀，备用。
提取物溶液：用二甲基亚砜(DMSO)作为溶剂配成浓度为5 mg/ml的溶液，备用。测定时稀释成相应浓度。
维生素C溶液：DMSO作为溶剂配成浓度为0.5 mg/ml的溶剂，备用。
4. 活性药材的筛选
取10 μL的样品溶液放入酶标板中，再加入90 μL的DPPH溶液，以维生素C溶液做阳性对照，以DPPH溶液作为标准，样品溶液为空白，室温放置30 min后，酶标仪517 nm测定，利用以下公式计算各种样品的清除率(k)，每个样品测定2次(按下图所示加样)。
式中：
Ae -- DPPH + 提取物混合溶液的吸光度
A0 -- 提取物溶液的吸光度
AD -- DPPH溶液的吸光度
AD0 -- DMSO+乙醇的吸光度
5. 活性药材的活性成分追踪
自主设计实验，对通过上述活性筛选出的活性最好的药材，进行提取和分离，对不同的流份进行进一步的活性追踪评价。
来源：丁香实验
