原理
紫外线对微生物有诱变作用,主要引起是DNA的分子结构发生改变(同链DNA的相邻嘧啶间形成共价结合的胸腺嘧啶二聚体),从而引起菌体遗传性变异。
材料与仪器
枯草芽孢杆菌
生理盐水 培养基
血球计数板 显微镜 紫外线灯 电磁搅拌器 离心机
生理盐水 培养基
血球计数板 显微镜 紫外线灯 电磁搅拌器 离心机
步骤
一、实验主要仪器设备和材料
仪器:血球计数板、显微镜、紫外线灯(15W)、电磁搅拌器、离心机。
菌种:枯草芽孢杆菌。
二、实验方法、操作步骤
1. 菌悬液的制备
(1)取培养48小时的枯草芽孢杆菌的斜面4-5支,用无菌生理盐水将菌苔洗下,并装入盛有玻璃珠的小三角烧瓶中,振荡30分钟,以打碎菌块;
(2)将上述菌液离心(3 000 r/min,离心15分钟),弃去上清液,将菌体用无菌生理盐水洗涤2-3次,最后制成菌悬液;
(3)用显微镜直接计数法计数,调整细胞浓度为每毫升108个。
2. 平板制作
将淀粉琼脂培养基溶化后,冷至55 ℃左右时倒平板,凝固后待用。
将淀粉琼脂培养基溶化后,冷至55 ℃左右时倒平板,凝固后待用。
3. 紫外线处理
(1)将紫外线灯开关打开预热约20分钟。
(2)取直径6 cm无菌平皿2套,分别加入上述菌悬液5 ml,并将无菌搅拌棒放入于平皿中。
(3)将盛有菌悬液的2套平皿置于磁力搅拌器上,在距离为30 cm,功率为15 W的紫外线灯下分别搅拌照射1分钟及3分钟。
在红光下,将上述经诱变处理的菌悬液以10倍稀释法稀释成10-1-10-6(具体可按估计的存活率进行稀释)。
4. 涂平板
取10-4、10-5、10-6三个稀释度涂平板,每个稀释度涂平板3只,每只平板加稀释菌液0.1 ml,用无菌玻璃刮棒涂匀。以同样操作,取未经紫外线处理的菌稀释液涂平板作对照。
取10-4、10-5、10-6三个稀释度涂平板,每个稀释度涂平板3只,每只平板加稀释菌液0.1 ml,用无菌玻璃刮棒涂匀。以同样操作,取未经紫外线处理的菌稀释液涂平板作对照。
5. 培养
将上述涂匀的平板,用黑布(或黑纸)包好,置37 ℃培养48小时。注意每个平皿背面要标明处理时间和稀释度。
6. 计数
将培养48小时后的平板取出进行细菌计数,根据对照平板上菌落数,计算出每毫升菌液中的活菌数。同样计算出紫外线处理1分钟、3分钟后的存活细胞数及其致死率。
将培养48小时后的平板取出进行细菌计数,根据对照平板上菌落数,计算出每毫升菌液中的活菌数。同样计算出紫外线处理1分钟、3分钟后的存活细胞数及其致死率。
7. 观察诱变效应
将细胞计数后的平板,分别向菌落数在5-6个左右的平板内加碘液数滴,在菌落周围将出现透明圈。分别测量透明圈直径与菌落直径并计算其比值(HC值),并与对照平板进行比较,根据结果,说明诱变效应。并选取HC比值大的菌落移接到试管斜面上培养。此斜面可作复筛使用。
三、实验结果
1. 将实验结果填入下表
来源:丁香实验