比浊法

将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。 测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。

 

一、实验主要仪器设备及材料
 

天平，721分光光度计，比色杯，恒温摇床，灭菌锅、无菌吸管，试管，三角瓶。
 

菌种：大肠杆菌。

 

培养基：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠液体培养基
 

二、实验方法、操作步骤
 

1.  种子液制备

取大肠杆菌斜面菌种1支，无菌条件下，挑取1环菌苔，接入无菌牛肉膏蛋白胨培养液中，静止培养18 h作种子液。

2.  接种培养
 

用无菌吸管准确吸取2 mL种子液，加入装有50 mL无菌牛肉膏蛋白胨培养液的250 mL三角瓶中，并于37 ℃下振荡培养（振荡频率250 r/min）。

3.  生长曲线测定

分别在0、1、2、3、6、9、12、15、18、21 h取下三角瓶，吸取1 ml培养液，用未接种的培养液为空白对照，将上述培养液于波长600 nm处比色(测定OD值前,将待测定的培养液振荡,使细胞均匀分布)，但要求消光度在0.10一0.65之间，对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数，才是培养液实际的OD值。
 

4.  实验结果

（1） 将不同时间点测定的OD值填入下表

（2）以上述表格中的时间为横坐标，OD₆₀₀值为纵坐标，绘制大肠杆菌的生长曲线。