原理
吉姆萨染液由天青，伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。PH对细胞染色有一些影响。细胞里各种成分均不蛋白质，因为蛋白质系两性电解质，带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境里正电荷增多，易和伊红结合，染色为偏红；在偏碱性环境里负电荷增多，易和美蓝或天青结合，染色偏蓝。
材料与仪器
原位杂交玻片
吉姆萨染色液 磷酸钠缓冲液 乙醇 二甲苯
染色盘 培养箱 滤纸
吉姆萨染色液 磷酸钠缓冲液 乙醇 二甲苯
染色盘 培养箱 滤纸
步骤
1. 将显影的玻片置于玻片架上，浸入盛有水的染色盘中。
（1）1个盘：pH6.8 10 mmol/l 磷酸钠缓冲液，所配的25倍稀释的吉姆萨染液。
（2）3个盘：水。
（3）脱水系列溶液：
①3个盘：分别盛50%、70%和95%乙醇。
②2个盘：盛有100%乙醇。
③3个盘：盛有二甲苯。
（1）1个盘：pH6.8 10 mmol/l 磷酸钠缓冲液，所配的25倍稀释的吉姆萨染液。
（2）3个盘：水。
（3）脱水系列溶液：
①3个盘：分别盛50%、70%和95%乙醇。
②2个盘：盛有100%乙醇。
③3个盘：盛有二甲苯。
3. 在25倍稀释的吉姆萨染液中染玻片20 s（依染色时间决定染色的强弱），将玻片在水中浸泡3次，每次2 min。
4. 连续用乙醇脱水系列溶液处理，每盘中浸泡2 min，将玻片移至二甲苯盘中，毎次浸泡2 min，共3次。
4. 连续用乙醇脱水系列溶液处理，每盘中浸泡2 min，将玻片移至二甲苯盘中，毎次浸泡2 min，共3次。
5. 在通风橱中，按如下操作压片固定：用一平头镊（拿在左手），从二甲苯中取出一块玻片，夹住磨面端置水平。加4滴Permount 的于另一端（切片所处位置），左手拿一干净的盖玻片，很缓慢地放在载玻片上（在加压片固定介质和盖玻片前，勿使玻片变干，因微小气泡会造成人为假象）。
6. 用3MM 滤纸，沿盖玻片边缘，小心吸去多余固片介质/二甲苯，并擦拭载玻片背面（勿擦拭盖玻片）。
7. 将玻片平放于一硬纸盒盘上，置42℃温孵箱2天使之凝固。
8. 以剃须刀片小心刮去载玻片背面残留胶乳，染料及固片介质。用镜头纸或普通棉纸擦去尘埃。放入玻片盒，必要时，载玻片上再注明标签。
9. 显微镜观察玻片，观察时可依信号强弱，调节光亮。
注意事项
1. 勿将玻片直立存放于玻片中，因此时固片介质尚未凝结。
2. 细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片一定清洁，要无酸碱污染。
3. 配制顼特液一定用优质甲醇，稀释染色一定用缓冲液，冲洗一定用水应近中性，不然可导致各种细胞染色反应异常，以致于识别困难，甚至造成错误的。
常见问题
染色实验与染色浓度，细胞的多少，室温有关，染液淡，温度低，细胞多则染色时间较长，反之，可减少时间，必要时可增加染液量或增加时间。冲洗前，需要在低倍显微镜下观察染色是否核质分明，是否染色清楚。
来源：丁香实验
