原理
根据细菌细胞在高渗溶液中或用乙醚蒸气处理后,会产生质壁分离这一现象,经染色后也可在普通光学显微镜下区分细胞壁和细胞质膜。
材料与仪器
巨大芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌
结晶紫水溶液 单宁酸(鞣酸)水溶液 磷钼酸水溶液 甲基绿水溶液 NaCl 结晶紫水溶液 Bouin氏固定液 硫堇水溶液 乙醚
乙醚蒸气瓶
结晶紫水溶液 单宁酸(鞣酸)水溶液 磷钼酸水溶液 甲基绿水溶液 NaCl 结晶紫水溶液 Bouin氏固定液 硫堇水溶液 乙醚
乙醚蒸气瓶
步骤
1. 单宁酸法
(1)将培养16~18小时的巨大芽孢杆菌按常法制成涂片。
(2)用5%单宁酸染5分钟后,水洗。
(3)用0.2%结晶紫染3~5分钟,水洗,吹干。用油镜观察,细胞壁呈紫色,细胞质呈淡紫色。
2. 磷钼酸法
(1)制备浓厚的涂片,在未干时浸入1%磷钼酸水溶液3~5分钟。
(2)用1%甲基绿水溶液染3~5分钟。
(3)水洗后,吹干,用油镜观察。细胞壁为绿色,细胞质无色。
3. 区分细胞壁与细胞质膜
(1)乙醚蒸气法
①将巨大芽孢杆菌涂布于盖玻片上,翻转盖玻片使其放在乙醚蒸气瓶的瓶口上蒸3分钟。
②取下盖玻片置Bouin氏固定液中30分钟后取出,水洗。
③用硫堇染色30秒钟。
④水洗,水封,置油镜下观察。
(2)NaCl法
①取一滴25%NaCl溶液于洁净的载玻片上。
②挑一小环培养6小时的枯草芽孢杆菌,在25%NaCl水滴中涂布均匀,待自然干燥。
③滴加0.01%结晶紫于其上,使盖满有菌部分,30秒钟后水洗,干燥,用油镜观察结果。
来源:丁香实验