原理
材料与仪器
抗酸染色液 盐酸酒精 吕氏美蓝染液
显微镜 玻片 接种环
步骤
2、涂片自然干燥后,用片夹挟住玻片一端,通过火焰固定。
3、涂抹面用滤纸片盖上,然后往滤纸片上滴加石炭酸复红染液,使滤纸片完全被染液浸湿,持玻片在小火上加温片刻然后离开火焰,此时可见到玻片上冒出蒸气。待蒸气消失后再加温,如此反复3~4次,约5min,加温时随时添加染液勿使纸片干涸。
4、玻片冷却后,用接种环挑去滤纸扔到污物盆内,流水冲洗玻片。
5、滴加3%盐酸酒精脱色,至涂抹均匀部位基本没有红色再脱下为止,水洗。
6、滴加吕氏美蓝染液30sec,水洗。
7、吸干、镜检。
4、溶液配制
萋-尼(Zichl-Neelsen)抗酸染色液
(1)石炭酸复红液:硷性复红4g,溶于95%酒精100ml,作成饱和溶液,再取该饱和液10ml与5%石炭酸溶液90ml混匀即成。
(2)3%盐酸酒精液。
浓盐酸3ml加入95%酒精97ml中即成。
(3)吕(Loeffer)氏美蓝染色液
美蓝2g,溶于95%酒精100ml中,作成饱和液。再取该饱和液30ml与0.01%氢氧化钾水溶液100ml混合均匀即可。
注意事项
1. 生物样品在使用时禁止直接接触,避免感染。
2. 使用完需要灭菌处理并且放置到指定位置统一处理。
常见问题
抗酸染色法acid-fast staining method 1882年由埃利希(F.Ehrlich)首创并经F.齐尔(Ziehl)改进而创造出的细菌染色法。其中最具代表性的为对结核菌的齐尔-尼尔森(Ziehl-Neelsen)染色法和齐尔-加贝特(Ziehl-Gabbet)染色法。用石炭酸复红染色后,用盐酸乙醇分色,再用美蓝进行对比染色,即不再脱色而呈现石炭酸复红的红色。
溶液配制
萋-尼(Zichl-Neelsen)抗酸染色液
(1)石炭酸复红液:硷性复红4g,溶于95%酒精100ml,作成饱和溶液,再取该饱和液10ml与5%石炭酸溶液90ml混匀即成。
(2)3%盐酸酒精液。
浓盐酸3ml加入95%酒精97ml中即成。
(3)吕(Loeffer)氏美蓝染色液
美蓝2g,溶于95%酒精100ml中,作成饱和液。再取该饱和液30ml与0.01%氢氧化钾水溶液100ml混合均匀即可。
来源:丁香实验