线形质粒DNA 5'-粘性末端去磷酸实验

微生物实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

经限制性内切酶酶切的质粒DNA 5'端均带有磷酸集团，如用此载体直接转化大肠杆菌，其自身环化几率非常高，影响连接、转化效率。因此一般酶切的质粒DNA要经脱磷，使用碱性磷酸酶(CIAP)去除5'端磷酸集团。

来源：丁香实验

操作方法

1、质粒DNA和CIAP以及BUFFER 37 ℃水浴30min 2、补充CIAP 再37 ℃水浴30min 3、加入50 mM EDTA至终浓度5 mM 75 ℃加热10min 失活CIAP 4、冷却至室温，酚-氯仿抽提，乙醇沉淀浓缩。 5、抽干溶液，加适量TE溶解。

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