酵母菌基因克隆实验

实验分类：

微生物实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

用一个假定的突变通过互补作用克隆酵母菌基因的一般方法。该突变为cdc101-1，它对酵母菌的生长来说既是隐性的又是温度敏感的。

来源：丁香实验

操作方法

互补法

1. 用含LEU 2作为选择标志的酵母菌DNA文库转化lea 2 cdc 101-1酵母菌株，在23℃培养，依据插入片段的大小，筛选2 000~20 000个Leu+转化体。 2. 影印平板转化体，将其转印到预热的选择性平板，并于37℃培养筛选互补温感突变的表型。过夜培养之后，含插入互补cdc 101-1突变基因片段的质粒的菌落以及含随机非互补质粒的潜在CDC 101+回复突变体均可