蛋白质纯化实验中,将会测定 b-glucuronidase (GUS) 的活性,是利用 p-nitrophenyl b-D-glucuronide 为基质,加入酵素反应后所释出之 p-nitrophenol 在碱性下呈现黄色,可测定 415 nm 之吸光度,利用 Beers Law 即可计算求得反应物之生成量。 本实验将利用已知浓度之 p-nitrophenol,测定其 A415,以求取 p-nitrophenol 在 GUS 活性测定条件下之 消光系数 (extinction coefficient)。
分光光度计测定溶液的吸光值1) 配制5 mM p-nitrophenol stock solution: 秤取 _____ mg p-nitrophenol,置于400 mL 烧杯中,加入25 mL 10×GUS assay buffer,加水至约200 mL,搅拌溶解后,加水至250 mL 并混合均匀。请配制三份。2) 配制50 μM p-nitrophenol 溶液:分别由三份stock solution 取适量以1×