相互作用克隆实验

实验分类：

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

相互作用克隆（也称表达克隆）用于确认并克隆编码与目的蛋白或「诱饵」蛋白相互作用的蛋白质。

这种方法绕过了纯化、微量测序或抗体制备等必要过程。

来源《精编分子生物学实验指南（第五版）》

来源：丁香实验

操作方法

相互作用克隆

1. 在 25 μl 新鲜制备的 40 mmol/L DTT 中重悬 250 U/μl PKA，并在临用前置室温约 10 min。PKA 可暂时保存在 4℃，但活性只能保持 2~3 天。2. 制备含以下成分的磷酸化反应的混合液：1 μl 10 U/μl PKA（从步骤 1 获得）3 μl 10 × PKA 缓冲液5 μl 10 mCi/ml（6000 mCi/mmol）[γ-32P] ATP1~1