融合蛋白化学降解实验

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

使用基因融合表达系统在大肠杆菌中表达外源基因已越来越受欢迎。其原因在很大程度上归因于融合系统能够产生大量的可溶性的融合蛋白。谷胱甘肽转移酶以及硫氧还蛋白均被证实能非常成功地生产正确折叠、有生物活性的蛋白质。其中每一种都备有方便的纯化方法，可将融合蛋白与细胞污染物分开。所产生的蛋白质适用于进行其生物学活性或（和）相互作用的研究。随着融合表达方法的普遍应用，将 N 端的携带蛋白部分从 C 端的目的蛋白中裂解出来的能力就显得更加重要。溴化氰（CNBr）用于蛋白质的裂解反应已有许多年，典型的反应是在 70% 甲酸中，pH 很低的条件下进行，裂解反应发生于甲硫氨酸的 C 端。

来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》

来源：丁香实验

操作方法

基本方案用溴化氰

1. 进行预试验以确定最短温育反应时间。冻干两小份各 50 μl 的融合蛋白溶液，将其中一份重悬于 50 μl 50 mg/ml CNBr / 70% 甲酸中，另一份重悬于 50 μl 不含 CNBr 的 70% 甲酸中，室温下反应。2. 在 0、8、24 及 48 h 的时刻，各取 5 μl 并冻干。3. 往所有冻干样本加 20 μl 1 × SDS 样品缓冲液，煮沸 10 min，加样于 SD