本 章 讲 述 了 基 于 电 泳 的 蛋 白 质 检 测 法 , 重 点 讨 论 总 蛋 白 质 检 测 、常 见 蛋 白 质 翻 译 后 修饰 (P T M ) 检 测 、磷 酸 化 作 用 检 测 和 糖 基 化 作 用 检 测 的 现 有 方 法 。 自 从 本 卷 首 次 出 版 的 20年 以 来 ,S D S - P A G E 以 及 随 后 的 蛋 白 质 染 色 法 ,在 纯 化 方 案 所 有 阶 段 中 , 依 然 是 确 定 含 蛋白 质 混 合 物 组 分 和 特 性 的 一 种 重 要 的 实 验 室 程 序 。呈 现 蛋 白 质 图 谱 的 常 规 作 法 ,包 括 了从 纯 化 每 个 步 骤 (从 细 胞 裂 解 物 到 最 终 产 物 ) 的 取 样 以 评 价 多 肽 组 分 、纯 度 、定 量 的 整 个 过程 。因 此 ,每 个 步 骤 取 出 的 样 本 应 能 逐 步 地 展 现 出 更 为 简 洁 的 多 肽 谱 ,从 而 显 示 出 目 标 蛋白 质 所 占 百 分 比 的 逐 渐 增 加 。
作者: 伯吉斯等,主译:陈薇,本实验来自「蛋白质纯化指南」
蛋白质凝胶染色法实验
总蛋白质的检测
1. 总蛋白质色度法染色
简便的目视检测、相对简单的使用及广大熟悉方法的用户基础群,使得考马斯亮蓝(C B B )—直是最普遍使用的总蛋白质凝胶染色剂。如需要比考马斯亮蓝染色更高的检测敏感度,那么银染法是可选择的色度方法。如果需要对切下的蛋白质进行质谱分析,则首选不会引入共价蛋白质修饰的染色方法。
总蛋白质的检测
1. 总蛋白质色度法染色