PEI 沉淀法分级分离可溶性提取物实验

材料与设备 提取液〔0.2% 脱氧胆酸钠 (DOC) 上清，见实验 1，P.146~147〕 Tissuc-TearorTM 匀浆器（Fisher Scientific 15-338-55) 硫酸铵 (AMS) 试剂 聚乙烯亚胺 (PEI)(10% 储液,pH7.9) 缓冲液 A 缓冲液 A+0.3mol/LNaCl 缓冲液 A+0,9mol/LNaCl 二硫苏糖醇 (DTT)(

1、细胞分盘：通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以 4×105 至 8×105 细胞/cm2 的密度平铺细胞于 60 mm 组织培养皿上（根据实验需要选择培养皿，使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的 70~90％）。根据细胞贴壁情况于含 5％ CO2 的 37 ℃ 温箱中孵育 8~24 h，当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染前换入 2 mL 预热的无血清培养基。2、制备 PEI-DNA 混