DNA 的 Tm 值测定实验

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

当DNA 的稀盐溶液加热到80～100 ℃ 时, 双螺旋结构即发生解体, 两条链分开, 形成无规线团。一系列物化性质也发生改变: 260 nm区紫外吸收值增高(增色效应) , 粘度降低, 浮力密度降低等。本实验旨在准确理解DNA 的Tm 值的定义及测定Tm 值的意义，掌握DNA 的Tm 值的测定方法。

来源：丁香实验

操作方法

紫外分光光度法

1 . 用循环恒温装置测Tm 按操作规程打开紫外分光光度计预热20 min。设定循环恒温装置于25 ℃ , 进行光吸收的初步测定。若是自制DNA, 先于25 ℃测其A260 , 用标准氯化钠-柠檬酸溶液稀释至A260 = 0.4。并注意使其终体积适合于比色杯( 1 ml或3 ml)。以标准氯化钠-柠檬酸溶液调整260 nm 下光吸收零点。然后将装有待测的稀释DNA 溶液的比色

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