mRNA 3' 末端体外加工

RNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

体外实验有两种策略；一是将包含 Po ly( A) 位点目标基因的质粒与无细胞提取物共同孵育，以使 RNA 聚合酶 II 转录目标基因，并对最初的转录进行加工；另一种策略是利用标准的噬菌体聚合酶驱动系统合成前 mRNA，然后与无细胞提取物共同孵育。

来源：丁香实验

操作方法

mRNA 3＇末端体外加工

―、材料与设备 (一）核提取物制备 1) 对数生长期的 HcLa 细胞。 2)PBS：0.2 g/LKCl ，0.2 g/L KH2P04, 8.0 g/LNaCl2.，16 g/L Na2 HPO4.7 H20 以下缓冲液 A、C、D 储存于 4℃，DTT 配成 1mol/L 储存溶液，现用现稀释。 3) 缓冲液 A:10 mmol/LHEPES，4℃ 时 pH7.9, 10 mmol