FISH 基本技术和问题解决

荧光原位杂交（FISH) 技术可以对染色体、细胞和组织中的特异核酸序列进行检测。明确检测到全染色体或染色体某个特定区域的结构或拷贝数发生改变是人类疾病重要的预兆因子。应用于染色体分析的 FISH 可以分为中期 FISH 和间期 FISH，两者的主要区别在预处理和杂交前的细胞制备工作。用于中期分析的细胞培养方法与标准核型分析的细胞培养相同。FISH 在细胞结构较少或者含有不同种群细胞的标本中最有效。FISH 技术适用于多种标本类型，特别是档案标本，如福尔马林固定石蜡包埋的组织。然而，探针杂交的成功与否决定于标本的制备。在间期 FISH 中，用各种增加靶细胞或组织通透性但保持重要组织形态结构的试剂预先处理，大大提高了探针的杂交效率。另外，预处理能减少组织或细胞的自发焚光背景。充分了解标本预处理过程的原理有助于解决试验中出现的问题。标本 DNA—旦可用于杂交，获得最理想信号的实验条件一般不要改动。本章旨在阐述关于标本制备和杂交方面 FISH 显著的特征。