用蛋白酶K和苯酚从哺乳动物细胞中分离高分子质量 DNA

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

这一程序改自最先由 Daryl Stafford 及其同事描述的方法（Blin and Stanfford 1976)。当需要大量哺乳动物 DNA，如用于 Somhern 杂交或者用噬菌体 λ 载体构建基因组文库时，应选用这一方法。从 5X10⁷ 培养的非整倍体细胞 ( 如 HeLa 细胞）中可获得大约 200 μg，长度为 100~150 kb 的哺乳动物DNA。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

用蛋白酶K和苯酚从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA

一、材料 1. 缓冲液和溶液醋酸铵（10 mol/L) (替代透析的一种选择，步聚 9) 透析缓冲液（替代乙醇沉淀的一种选择，步骤 9)（50 mmol/L Tris-Cl ( pH 8.0)，10 mmol/L EDTA (pH 8.0)，准备 4 份 4 L 透析液并于 4℃ 保存）乙醇（替代透析的一种选择，步骤 9) 裂解缓冲液（10 mmol/L Tris-Cl (pH 8.