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黏粒文库的扩增和贮存(在滤膜上扩增)

实验分类:

DNA 实验

最新修订时间:

简介

应用此种扩增方法,文库不容易失真,这是由于在任何一步骤中,含有不同重组黏粒的混合菌群都不会在生长中发生竞争。但扩增过程冗长,而且有时由于主滤膜保存后菌落不再生长而丢失。本节还提供一种备选方法,即在 TB 平板上扩增。该备选扩增方案使那些生长不良的黏粒克隆易于丢失。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源:丁香实验

操作方法

黏粒文库的扩增和贮存(在滤膜上扩增)

一、材料 1. 培养基 含 25 μg/ml 卡那霉素 TB 琼脂平板(150 mm) TB 培养基 2. 专用设备 无去污剂、无菌的硝酸纤维素膜或尼龙滤膜(137 mm)。 3. 载体和菌株 λ 噬菌体包装反应 适宜的大肠杆菌接种菌株(如 XLl-Blue、ED8767、NM554、DH5αMCR) 二、方法 预培养 1. 计算能产生 3 万~ 5 万个转化的菌落的包装反应

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