应用黏粒载体构建基因组 DNA 文库

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

在 λ 噬菌体中构建基因组 DNA 文库的步骤与在黏粒载体中的步骤基本一致。在这两种系统中，真核 DNA 在体外与载体 DNA 连接，形成能包装到 λ 噬菌体颗粒中的多联体。构建在 λ 噬菌体中的文库以具有感染性的重组噬菌体形式贮存和增殖。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

应用黏粒载体构建基因组DNA文库

一、材料 1. 缓冲液与溶液氯仿 10 X 去磷酸化缓冲液（CIP 缓冲液）乙醇苯酚: 氯仿（1:1, V/V) SM 醋酸钠（3 mol/L, pH 5.2) TE ( pH 8.0) 2. 酶与缓冲液 T4 噬菌体 DNA 连接酶牛小肠碱性磷酸酶（CIP) 限制性内切核酸酶：Bam HⅠ，MboⅠ，XbaⅠ 只切割黏粒载体而不切割基因组插入 DNA 的限制性内