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可被单一限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体 DNA 的制备实验

实验分类:

DNA 实验

最新修订时间:

简介

在某些情况下,制备好的 λ 噬菌体 DNA 经限制酶的简单消化即可用于克隆。但只有当所用载体能用遗传学方法筛选含有外源 DNA 序列的重组噬菌体时(如 EMBL 系列、λ2001、λDASH、λZAP、λgt10),这种方案才是可行的。因为在这种情况下,不必采取步骤来减少非重组噬菌体的形成。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源:丁香实验

操作方法

可被单一限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体DNA的制备实验

一、材料 1. 缓冲液和溶液 ATP ( 10 mmol/L ) 氯仿 EDTA ( 0.5 mol/L,pH 8.0) 乙醇 酚:氯仿(1:1,V/V) 乙酸钠(3 mol/L,pH 7.0)(使用 pH 7.0 而不是常用的 pH 5.2 的乙酸钠非常重要。因为对在消化后用来除去缓冲液中二价阳离子的 EDTA 来说,在 pH 5.2 且浓度超过 5~10 mmol/L 时,将从溶

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