可被单一限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体 DNA 的制备实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

在某些情况下，制备好的 λ 噬菌体 DNA 经限制酶的简单消化即可用于克隆。但只有当所用载体能用遗传学方法筛选含有外源 DNA 序列的重组噬菌体时（如 EMBL 系列、λ2001、λDASH、λZAP、λgt10），这种方案才是可行的。因为在这种情况下，不必采取步骤来减少非重组噬菌体的形成。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

可被单一限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体DNA的制备实验

一、材料 1. 缓冲液和溶液 ATP ( 10 mmol/L ) 氯仿 EDTA ( 0.5 mol/L，pH 8.0) 乙醇酚：氯仿（1:1，V/V) 乙酸钠（3 mol/L，pH 7.0）（使用 pH 7.0 而不是常用的 pH 5.2 的乙酸钠非常重要。因为对在消化后用来除去缓冲液中二价阳离子的 EDTA 来说，在 pH 5.2 且浓度超过 5~10 mmol/L 时，将从溶