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外切核酸酶 Ⅲ 消化产生多组嵌套缺失突变体

实验分类:

DNA 实验

最新修订时间:

简介

逐步地从靶 DNA 的一端或另一端删除多个寡核苷酸的嵌套式缺失突变方法被用来确定功能性顺式调控元件的边界,早先曾作为指导 DNA 测序的模板。该方法依赖于核酸酶,这些核酸酶均以可预测的方式消化 DNA, 其中外切核酸酶 HI 是目前最好的。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。

来源:丁香实验

操作方法

外切核酸酶 Ⅲ 消化产生多组嵌套缺失突变体

材料 缓冲液和溶液 贮存液,缓冲液和试剂的成分清参阅附录 1。 将贮存液稀释到合适的浓度。 dNTP 溶液中含有 dATP、dGTP 和 dTTP, 每种 dNTP 浓度为 0.5 mmol/L,溶在 25 mmol/L Tris-Cl(pH8.0) 中 乙醇(100%, 冰冷;70%, 室温。) 10x 外切核酸酶Ⅲ缓冲液 660 mmol/L Tris-Cl(pH8.0) 66 mm

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