利用大引物 PCR 在同一试管中进行高效快速定点诱变实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

大引物方法最初是由 KAMMANN 等人（1989）建立的，现在的方法是经过许多研究人员包括 Sarkat 和 Sommer (1990,1992), Giebel 和 Spritz(1990)，Landt 等（1990),Marini 等（1993), Picard 等（1994),Ling 和 Robinson(1997) 等人修改后产生的基于 PCR 诱变的最简单、成本低廉的方法。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。

来源：丁香实验

操作方法

利用大引物 PCR 在同一试管中进行高效快速定点诱变实验

材料缓冲液和溶液贮存液，缓冲液和试剂的成分请参阅附录 1。将贮存液稀释到合适的浓度。 10x 扩增缓冲液含有四种 dNTP 的混合溶液，每一种 dNTF 的浓度为 2.5 mmol/L 酶和缓冲液热稳定 DNA 聚合酶 [Hot-Tub DNA 聚合酶（Amersham) 或同类产品] 大多数 DNA 聚合酶保存在含 50% 甘油的贮存液中。这种溶液非常粘稠，很难准确取量。最