用 Taq DNA 聚合酶进行双脱氧测序反应实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

热稳定 DNA 聚合酶除了在 PCR 反应中应用外，还可用来替代测序酶或 Klenow 片段进行双脱氧链终止法测序。它在高温下（70°C) 进行等温链终止反应的能力可减少测序反应中由于模板 DNA 上引物假结合位点与引物退火错配产生的问题，它还可用于富含二级结构模板的测序。本实验源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。

来源：丁香实验

操作方法

用 Taq DNA 聚合酶进行双脱氧测序反应实验

材料缓冲液和溶液试剂、缓冲液、储液的组成参见附录 1, 储液使用前稀释到适当浓度。去离子蒸馏水（冰预冷） ddNTP,4 种 ddNTP 储液（5 mmoI/L) dNTP,4 种 dNTP 储液（lmmol/L) 甲酰胺加样缓冲液 10x 标记混合液和 ddNTP 延伸/终止混合液当测序模板富含二級结构时，用等摩尔 7-脱氨-2'-dGTP 代替 10X 标记混合液和 ddN