制备和转化感受态大肠杆菌的Inoue方法实验（制备超级感受态细胞）

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

采用 Inoue 的方法（1990）制备大肠杆菌感受态细胞很好时甚至能达到 Hanahan 方法（1980）的转化效率。但在标准的实验室条件下，达到 1X10⁸~3X10⁸ 个转化克隆/ μg 质粒 DNA 的转化效率更为常见。与 Hanahan 方法相比，这一方法的优点在于并不过分地讲究细节，但是重复性更好，而且更有预见性。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

制备和转化感受态大肠杆菌的Inoue方法实验（制备超级感受态细胞）

一、材料 1. 缓冲液和溶液 (1) 二甲亚砜 DMSO 二甲亚砜的氧化产物据推测为二甲硫醚，是转化的抑制物（Hanahan 1985）。为避免上述问题，应购买高质量的 DMSO。 (2) Inoue 转化缓冲液用前置于冰上预冷至 0℃。 2. 核酸和寡核苷酸质粒 DNA ( 重组质粒） 3. 培养基 (1) LB 或 SOB 培养基（培养最初的细菌生长物） (2) SOB