大规模制备和浓缩反转录病毒原液实验

实验分类：

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

对于某些用途来说（如体内感染细胞），有必要浓缩反转染病毒原液以增加其滴度。如果想要用不编码可选择标记的病毒感染一群细胞，必须用髙滴度的病毒。操作中需用几百毫升至几升的产毒细胞上清。

来源：丁香实验

操作方法

离心法

1. 将产病毒细胞按1：10或1：20从刚生长汇片的细胞分传至20~50个10 cm 培养皿中，培养细胞至50%~90%汇片。 2. 弃去培养液，轻轻加入半量的培养液，注意培养液碱性不要过大，培养2~3天。 3. 收取上清，用0.45 μm 的滤器过滤，贮存于-70℃或-80℃，或马上进行滴定和浓缩。 4. 滴定病毒原液。 5. 对于大体积病毒原液，用无菌的

聚乙二醇相沉淀及层析法浓缩病毒

1. 制备病毒原液。加5 mol/l NaCl至病毒原液中，4℃不断搅拌，至终浓度达到0.4 mol/l。 2. 缓慢加入PEG 6000至终浓度8.5%，4℃持续搅拌1~1.5 h。 3. 7000 g 离心10 min，用原病毒体积1%的NTE缓冲液溶解沉淀。直接使用或贮存于-70 ℃或-80℃。 4. 准备好Sepharose CL-4B或CL-2B柱子，用NT