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简介
区域特异性诱变实验,用于(1)基因诱导改造(2)基因的特定表达(3)临床抗肿瘤等靶点的发挥。
来源:丁香实验
操作方法
1. 用限制性内切核酸酶消化DNA以获得目的DNA片段,将靶片段双向克隆到M13噬菌体载体或含有M13复制起始子的质粒载体中。从100 ml 感染细抱培养物中提取单链DNA。 2. 在三个微量离心管内各加入40 ug 1 mg/ml 的单链DNA,如果靶序列的两条链都要被利用,则需用6个反应。 3. 亚硝酸反应:在一个管内加入10 ul pH4.3的2.5 mol/l 乙酸钠和50 ul 2
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