M13 噬菌体衍生载体的制备实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

M13噬菌体是一种丝状噬菌体，感染宿主后不裂解细菌细胞，只利用细胞内物质完成自身增殖，组装成完整病毒颗粒后被宿主细胞分泌而出，宿主细胞仍能继续生长分裂。为分子生物学中理想的质粒载体。基因间隔区的有些核苷酸序列即使发生突变、缺失活插入外源DNA片段，也不会影响M13DNA的复制，这为M13DNA构建克隆载体提供了条件。

来源：丁香实验

操作方法

载体衍生法

1. 将来自一个单菌落的过夜培荞新鲜菌液按1 ：50稀释，在含有适当抗生素的2xYT培养液（1~5 ml）中，于37℃培养至OD600=0.1。 2. 按1，10，20，50 MOI感染细胞，于37℃剧烈振荡下培养4.5 h。 3. 4 000 g 离心10 min，收集上请液并于65℃加热灭活15 min。 4. 从上清液中提取单链DNA，在琼脂糖凝胶上分析单