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M13 噬菌体衍生载体的制备实验

实验分类:

DNA 实验

最新修订时间:

简介

M13噬菌体是一种丝状噬菌体,感染宿主后不裂解细菌细胞,只利用细胞内物质完成自身增殖,组装成完整病毒颗粒后被宿主细胞分泌而出,宿主细胞仍能继续生长分裂。为分子生物学中理想的质粒载体。基因间隔区的有些核苷酸序列即使发生突变、缺失活插入外源DNA片段,也不会影响M13DNA的复制,这为M13DNA构建克隆载体提供了条件。

来源:丁香实验

操作方法

载体衍生法

1. 将来自一个单菌落的过夜培荞新鲜菌液按1 :50稀释,在含有适当抗生素的2xYT培养液(1~5 ml)中,于37℃培养至OD600=0.1。 2. 按1,10,20,50 MOI感染细胞,于37℃剧烈振荡下培养4.5 h。 3. 4 000 g 离心10 min,收集上请液并于65℃加热灭活15 min。 4. 从上清液中提取单链DNA,在琼脂糖凝胶上分析单链DNA,并

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